基于多肽的核酸递送是一种最新的递送技术,能够显著提升各类细胞,包括原代细胞、难转细胞系的核酸转染。GentleFectTM技术基于高通量多肽筛选平台,精准识别具有相分离潜力的内源多肽序列,开发了针对常见原代T细胞的Gentle T30原代T细胞核酸转染试剂。多肽通过液-液相分离自组装形成纳米级微滴,借助细胞膜胞饮作用实现高效内化,在维持细胞活性前提下显著提升各类物种原代T细胞的核酸递送效率,尤其是提高大片段基因的递送效率。
• 同时适用于各类核酸分子转染,包括mRNA, siRNA, circRNA, Crispr等;
• 预混合转染液和转染缓冲液,仅需往试剂中加入核酸,即可一步完成转染配置。
短期4℃保存,长期-20℃保存。
• Gentle T30 原代T细胞核酸转染试剂
不可以,原代T细胞因自身独特的免疫特性,其细胞内的cGAS-STING信号通路对外源双链DNA较为敏感,不仅引发细胞周期阻滞,还会通过内源性凋亡途径导致细胞死亡,常规转染条件下,其细胞活率和阳性率会显著降低。见参考文献:Enhancement of the viability of T cells electroporated with DNA via osmotic dampening of the DNA-sensing cGAS–STING pathway. Nature Biomedical Engineering.
原代T细胞为悬浮细胞,本试剂可以深度覆盖转染更多的T细胞数量,如96孔板转染,可以实现从1x104到2x105细胞数范围的高效低毒转染。建议按照说明书推荐的转染试剂用量进行转染或根据细胞量来等比增加/减少转染试剂的用量,最低可以转染5x103个细胞。
① 转染前应确保细胞处于良好的生长状态,建议细胞活率大于90%;
② 适当增加转染试剂和核酸的用量。
③ 适当延长转染时间,孵育时间长短影响阳性率和细胞活率,根据细胞特性可尝试更短或更长孵育时间。
④ 不同物种的T细胞衰老速度不同,建议在激活后的2-4天内转染,防止因细胞衰老导致转染效率的下降
① 细胞转染孵育时请勿使用含FBS的培养基,FBS会严重影响细胞转染效果;
② Gentle T30转染试剂不建议剧烈涡旋,推荐使用移液器温和反复吹打混匀。
① 本文中出现的离心程序设置均为室温,300g,5分钟;
② 在转染结束后,可加入1 mL完全培养基轻吹混匀,终止转染的同时可去除转染试剂对细胞离心的影响(转染试剂轻微粘稠是属于正常现象);
③ 在转染结束时,EP管离心后没有看到细胞沉淀是正常现象,这是细胞量较少导致的,可在吸取上清液时留20-50 μL液体,防止吸取到细胞。
① 细胞转染孵育时请勿使用含FBS的培养基,FBS会严重影响细胞转染效果;
② 转染试剂不建议剧烈涡旋,推荐使用移液器温和反复吹打混匀。
Gentle NK30 原代NK细胞核酸转染试剂产品说明书 v1.3